收集白血病细胞提取总RNA,检测RNA浓度并按照逆转录试剂盒说明书完成逆转录以cDNA为模板进行RT-PCR。引物如下:c-mpl上游弓I物5-CCTACTGCTGCTAAAGTGGCAAT-3,下游5-CAATAGCTTAGTGGTAGGTAGGA-3;TPO游弓丨物5-TCTGTCCAGCCCCGTAGGTC-3,下游5-GTTCCATCCACAGGTCCGTG-3;GAPDH上游弓丨物5-CAGCGACACCCACTCCTCCACCTT-3,下游5-CATGAGGTCCACCACCCTGTTGCT-3。扩增体系如下:2xQuantiNovaSYBRGreenRT-PCRMasterMix10卩1,正向和反向引物(10Hmol/L)各卩1,模板2卩1,ddH2O补齐至20卩1。扩增程序:95C5min;95C20s,58T:20s,72C30s,40个循环;每个样本设置3个复孔实验独立重复3次以GAPDH作为内参,2-△△CT计算基因相对表达量。
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